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Proteintech一級代理
產品時間：2020-05-29
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MARCKSL1抗體1出版物
兔多克隆| 貨號：11422-1-AP
物種特異性：人類，老鼠
在以下位置檢測到正白平衡：人腦組織
在以下方面檢測到陽性IHC：人肺癌組織，人肝癌組織，人胰腺癌組織
經過測試的應用
應用范圍：WB，IHC，ELISA
應用程序未經測試？請參閱我們的保證
注意：建議使用pH 9.0的TE緩沖液進行抗原回收；（*）或者，可以用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復
推薦稀釋度：
白平衡：1：500-1：1000
IHC：1：20-1：200
取決于樣品，在“驗證”選項卡中檢查數據
資源：兔子
純化方法：抗原親和純化
同型：IgG抗體
存儲：具有0.1％疊氮化NA和50％甘油pH 7.3的PBS。儲存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下儲存。
免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967
全名：類馬克1
計算分子量：195aa，20 kDa
觀察分子量：48 kDa的
GenBank登錄號：BC007904
基因編號（NCBI）：65108
基因符號MARCKSL1
同義字F52，Mac MARCKS，MACMARCKS，MARCKS like 1，MARCKS like protein 1，MARCKS related protein，MARCKSL1，MLP，MLP1，MRP
MARCKS樣蛋白1（MARCKSL1）在神經組織中廣泛表達，也被稱為MARCKS樣蛋白（MLP）或MARCKS相關蛋白（MRP），屬于MARCKS家族，是高度酸性的肉豆蔻酰化家族底物廣泛分布在包括巨噬細胞在內的各種細胞類型中。由于SDS凝膠上的異常遷移或磷酸化，該蛋白質的計算分子量為20 kDa，表觀分子量為42-48 kDa。MARCKSL1的遺傳破壞導致神經管閉合缺陷，取決于肌動蛋白功能，細胞形狀和細胞遷移的協調控制的事件。人們認為MARCKSL1調節肌動蛋白的細胞骨架，從而參與主要的細胞反應，如吞噬作用，分泌，運動，有絲分裂和膜運輸。
免疫印跡和免疫沉淀法: 細胞裂解物的制備: 將 ripa 緩沖液加入細胞(35mm 的培養皿中加入100l，60mm 的培養皿中加入200l，100mm 的培養皿中加入500l) ，同時將培養皿置于冰上。 刮去電池，輕輕地搖動懸掛，或者在冰冷的房間里用搖桿或者軌道振動器搖動15分鐘來溶解電池。 在冰水中用浴用聲波儀進行聲波處理，直到樣品不再粘稠。 將細胞在12000克的溫度下4 °c 離心5分鐘，取出顆粒。 把上清液移到新鮮的管子里。 細胞裂解液的終濃度為2-3克 / 升。 對 wb 來說，在裂解液中加入4個 sds 停止緩沖液，終濃度為1個 sds。 免疫印跡法: 1。 煮沸10分鐘后，20-50升樣品將載入 sds 頁面。 對于大多數蛋白質來說，建議以每道負荷量30-80克總溶解蛋白質，因為細胞中80% 的蛋白質種類濃度非常低。 圖2。 將凝膠浸泡在免疫印跡轉移緩沖液中。 聚偏氟乙烯膜被推薦用于大多數蛋白質。 將薄膜浸入甲醇中1-2分鐘，將薄膜在轉移緩沖液中浸泡10分鐘，然后將其放置在一疊厚厚的浸過緩沖液的濾紙上。 然后用另一堆浸滿緩沖液的過濾紙蓋上。 把轉移裝置蓋上。 凝膠應該在膜的負面。 圖3。 以每平方厘米1毫安的電流跑90分鐘。 圖4。 在室溫下或在4 °c 的溫度下用緩沖液將細胞膜孵育1小時。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 5. 用阻斷緩沖液稀釋一級抗體。 在室溫下將細胞膜培養1.5小時。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 圖6。 用阻斷緩沖液稀釋二級抗體。 在室溫下將細胞膜培養1小時。 用清洗緩沖液清洗隔膜35分鐘。 圖7。 用清洗緩沖液清洗隔膜310分鐘。 圖8。 用 ecl 顯色。
免疫沉淀法: 1。 將200-350升的細胞裂解液(含有1-3毫克總蛋白質)轉移到微濾管中。 加入150-300升培養液和1-4克一級抗體到細胞(或預先清除的)裂解液中。 JIA抗體濃度應通過滴定法確定，用對照 igg (對應于一抗源)建立陰性對照實驗。 在4 °c 的環境中輕輕搖晃孵化箱2-4小時或過夜。3。 加入50升蛋白 a 或克瓊脂糖漿以獲得免疫復合物。在4 °c 下輕輕搖動混合物1-4小時。 取下端蓋，必要時將上清液從旋轉塔底部釋放出來，再懸浮混合物以提高流速。 用1湯匙含1個蛋白酶抑制劑的量清洗珠子5次。 后一次清洗后，用500克離心機將旋轉塔在4c 下離心30秒，用收集管收集過濾液，然后丟棄。 將自旋柱置于新鮮的微濾管中，并將洗脫液集中起來。 用40l 洗脫緩沖液洗脫，離心8000ー10000g，在4c 條件下洗脫1min，再用新的40l 洗脫緩沖液洗脫一次。 在洗脫液中加入10l 堿中和緩沖液和30l4樣品緩沖液，95-100c 加熱5分鐘。 存儲在零下20攝氏度或加載20-40升在 sds-頁面，并檢測它由寬帶。、
組織培養細胞免疫熒光方案: 1。 將細胞培養在小的圓形蓋玻璃上。 4% pfa 或有機溶劑固定細胞20分鐘在4 c (如果你使用有機溶劑固定，只需跳過步驟3，直接進入步驟4)。 將玻璃倒入0.2% ttiton x-100-pbs 中5分鐘。4。 用 bsa-pbs 在室溫下封閉細胞1h 或在4 °c 下封閉過夜。 5. 在蓋玻片上加入50升特異性初級抗體，在室溫下的潮濕容器中培養1小時。 在每個蓋玻片上加入50升熒光標記的二級抗體，室溫下在黑暗中的潮濕容器中孵育1小時。 用15% 的甘油或者小量的水溶液裝在載玻片上。8。 在邊緣用指甲油封住YIN唇。石蠟包埋組織切片的免疫組織化學:。 二甲苯分別用兩種方法分離載玻片40分鐘和20分鐘。 轉移載玻片到100% 酒精，95% 酒精，80% 酒精，60% 酒精和 ddh2o5分鐘。 將載玻片放入裝有抗原恢復緩沖液的容器中，中間放置微波幾分鐘(700瓦烤箱) ，讓恢復液在室溫下冷卻。 用 tbs 清洗25分鐘。 在3% h2o2溶液中培養10分鐘，阻斷內源性過氧化物酶活性。 用 tbs 清洗25分鐘. 7。 將5-10% 的山羊血清置于 tbs 液中室溫封閉30分鐘。 排水滑梯幾秒鐘(不要沖洗) ，擦拭圓形部分。9。 應用 tbs 的一級抗體。 在室溫下孵化1小時或在4 °c 下孵化一夜。10。 用湯匙沖洗25分鐘。 在室溫下應用預想的二級抗體30分鐘。 用 tbs 沖洗25分鐘13。 在室溫下用色原顯影，在顯微鏡下觀察。14。 用流動的自來水沖洗5分鐘。 在市長的蘇木精浴中反染30-60秒。 在水中洗7-8次，然后自來水3分鐘。17。 分別用60% 、80% 、95% 和100% 的酒精脫水5分鐘。 轉移到二甲苯5分鐘。 空氣30分鐘。19。安裝
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