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Vectorlabs北京試劑
產品時間：2022-11-25
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生物結合試劑 SoluLINK 生物結合技術已經被設計成允許所有類別的生物分子的快速和可量化的結合。該技術是基于 HyNic 與4FB 反應生成穩定的雙芳腙鍵。與其他的共軛化學不同，這些連接體是發色的，這意味著它們吸收光線，因此可以很容易地通過簡單的光譜儀讀數進行量化。雙芳腙生色團對于測量每個生物分子上的接頭數和兩個生物分子之間的結合程度是至關重要的。可量化的接頭允許倫比的重復性從批量到批量的生物共軛制備。去除未包含的標簽的純化是至關重要的，因為它導致減少非特異性結合，更高的靈敏度和更高的信噪比在您的測定。盡管它們看起來很簡單，但是由于低效的共軛化學和缺乏純化步驟，相互競爭的“混合和使用"共軛產物并不能很好地工作。這使得反應混合物中既有未結合的生物分子(例如抗體) ，也有過量的標記(例如氟、寡核苷酸和酶)。ChromaLINK 物素和辛是唯的試劑，他們的類型，可以直接定量連接到生物分子。這些試劑含有與 SoluLINK 生物結合技術相同的雙芳基腙鍵。物素化的生物分子被有效地固定在鏈霉親和素包被的表面，如磁珠和瓊脂糖。NanoLINK 和 MagnaLINK 鏈霉親和素磁珠具有比其他市售產品高15倍的物素結合能力。鏈霉親和素瓊脂糖超高性能 TM 還具有市場上任何瓊脂糖珠最高的物素結合能力。SoluLINK 結合試劑盒包含生產和純化高質量結合所需的一切。共軛連接器和附件也可作為靈活的獨立產品擴大工作。這些接頭是理想的蛋白質交聯，蛋白質標記，化學交聯，蛋白質交聯和抗體綴合。所有 SoluLINK 產品均按照 TriLink ISO9001:2015質量體系生產，以確保持續供應高質量產品。
抗體-寡核苷酸 All-in-OneTM 結合試劑盒 A-9202
抗體-寡核苷酸全合一結合試劑盒使用的 SoluLINK 生物結合技術將抗體與寡核苷酸連接起來。琥珀酰亞胺基 -4-甲酰基苯甲酰胺(S-4FB)修飾的寡核苷酸和琥珀酰亞胺基 -6-肼基酰胺(S-HyNic)修飾的抗體形成抗體-寡核苷酸偶聯物。該試劑盒專門設計用于將100μg 抗體偶聯到20-80核苷酸范圍內的任何氨基修飾的寡核苷酸。主要特點: 任何哺乳動物單克隆或多克隆 IgG 同種型抗體都可以與寡核苷酸偶聯，并在總動手時間約4小時內純化。SoluLINK 生物共軛技術在354nm 處形成穩定的、紫外可追蹤的雙芳基腙鍵，其摩爾消光系數為29,000L mol-1cm-1。由于發色共軛鍵的形成，共軛反應可以用分光光度法定量。抗體標記/修飾劑類型寡核苷酸反應性胺推薦儲存2 °-8 ° C-不要凍結應用抗體標記,s-HyNic (100μg)• Oligo 再懸浮液(1mL)•1X 修飾緩沖液(1.5 mL)•珠洗液緩沖液 A (5mL)•珠洗液緩沖液 A (250μL)•紅帽旋轉柱(2)•黃帽旋轉柱 A無水 DMF (1.5毫升)2-肼基吡啶(2-HP)試劑(500μL)親和磁珠(100μL)2毫升收集管(14) S-4FB (1毫克)棕色帽旋轉柱 C (2)
抗體寡核苷酸一體化結合 KitCat。沒有。A-9202-001儲存室2 °-8 ° C ー不要凍結。抗體-寡核苷酸全合一結合試劑盒需要100μg 抗體，濃度為1mg/ml。抗體緩沖液不應含有載體蛋白，如 BSA 或明膠，不應含有高濃度(> 25%)的甘油。該試劑盒設計用于在20-60核苷酸范圍內的25 OD260單位的氨基修飾寡核苷酸的最佳執行。短于20個核苷酸的寡核苷酸不能成功地與該試劑盒結合; 長于60個核苷酸的寡核苷酸可以使用，盡管以犧牲結合產率為代價。如果需要，可以使用至少15 OD260單位的氨基修飾寡核苷酸。抗體-寡核苷酸全合一結合試劑盒包含所有必要的試劑和組分來產生一個抗體-寡核苷酸結合物。基于的 SoluLINK 生物結合技術，它允許任何純化的 IgG 同種型哺乳動物抗體在三個階段的過程中進行結合和純化，這個過程大約需要11小時，只需要2小時的動手時間。首先用 S-4FB 修飾用戶提供的氨基寡核苷酸，然后用 S-HyNic 修飾用戶提供的抗體。接下來，兩個修飾的生物分子在反應催化劑存在下混合形成共軛物，隨后使用磁性親和固相進行純化。這個過程的結果是20-60μg 的高純度抗體-寡核苷酸偶聯物是準備使用(圖1)。產量在很大程度上取決于寡核苷酸的長度，較短的寡核苷酸通常具有較高的產量。最終的共軛物濃度通常在0.1 -0.3毫克/毫升之間。
抗體-寡核苷酸全合一結合試劑盒遵循三階段方案，每個階段需要幾個小時才能完成。如果需要，該方案可以分為兩天，第1天進行階段1(用 S-4FB 修飾氨基寡核苷酸，持續4小時) ，第2和第3階段(用 S-HyNic 修飾抗體，然后偶聯物形成和純化，持續6.5小時)在第2天。不建議在第二階段之后停止該程序。從4FB 標記的寡核苷酸開始大大減少了完成過程的總時間。用 S-4FB1修飾氨基寡核苷酸如果從4FB 修飾的寡核苷酸開始，直接進入階段2。輸入氨基寡核苷酸細節到抗體-寡核苷酸結合計算器直接從寡核苷酸供應商的分析證書進入抗體-寡核苷酸結合計算器.a)寡核苷酸名稱) OD260單位供應商提供的 A 部分)寡核苷酸摩爾消光系數(公升 mol-1cm-1) d)寡核苷酸分子量(道爾頓) e)每 OD260納摩爾產品數據表中列出
重懸浮氨基寡聚體1。確保至少15 OD260單位的寡核苷酸可用于修改。2。將裝有凍干寡核苷酸的小瓶以15,000 x g 的速度離心15秒，使凍干物質在試管底部沉淀。3。如果試管中含有15-25 OD260單位的寡核苷酸，向試管中加入50μl 的寡核苷酸再懸浮液。如果試管中含有超過25OD260單位的寡核苷酸，加入足夠體積的寡核苷酸重懸浮溶液以產生0.5 OD260/μl 的溶液(例如，如果有31OD260單位的寡核苷酸，加入62μl 的寡核苷酸重懸浮溶液)。讓小球重新水合1分鐘，然后以中速輕輕旋轉溶液10秒，以幫助溶解。重復這個過程，直到沒有未溶解的凍干殘留物。測量低聚物濃度低聚物濃度可以使用微容量紫外-可見分光光譜儀(例如 NanoDropTM)或傳統的紫外-可見分光光度計來測量。按照下面的說明可用的儀器類型。用納米滴定法測定低聚物濃度: 1。在微量離心管中，將2.0 μl 低聚物溶液轉移到398μl 超純水中，制備1:200稀釋液。攪拌均勻。2。選擇納米滴上的“核酸"模塊，用超純水初始化儀器。3。清洗樣品臺座，用2μl 超純水沖洗。測量1:200寡核苷酸溶液的260nm 吸光度，如在10mm 光程窗口中顯示的那樣。5。將 A260值除以5，計算出庫存寡聚溶液的 OD260/μl 濃度。
用常規UV-Vis測定寡聚物濃度
分光光度計：
1.在微量離心管中，通過轉移制備1:500稀釋液 將2.0μl低聚溶液加入998μl超純水中。通過以下方式充分混合渦流。2.使用1cm路徑長度的石英比色皿，空白分光光度計 在260nm下使用超純水。3.測量1:500寡聚物溶液的260nm吸光度。4.將該數字除以2，計算儲備低聚溶液。OD260/μl氨基寡聚物濃度通過方法，將該值乘以50μl，以確定低聚體可用于修飾。如果可用的OD260單元少于15個，在繼續之前獲得額外的寡聚物。D、 緩沖液交換氨基寡聚物1.擰松瓶蓋半圈，準備一個紅色瓶蓋旋轉柱，擰下底部封口，并將其放入2毫升的空容器中收集管。2.使用實驗室標記，在柱的外側放置一條垂直線。確保該線朝外（遠離轉子中心）在該步驟和所有后續步驟中。3.以1500 x g離心柱1分鐘以除去儲存物緩沖器重要提示：確保離心機設置為“g"或RCF，而不是RPM在所有離心步驟中。4.從收集管上取下柱（丟棄收集含有過量緩沖液的管），并將柱置于新的2ml中收集管。5.緩慢小心地將50μl寡聚物溶液移入樹脂床的中心。小心不要讓低聚溶液接觸管壁；它必須向下通過樹脂本身。6.更換蓋子并松開半圈。7.以1500 x g離心柱2分鐘，以回收脫鹽的寡聚物進入收集管。8.將此溶液轉移到新的微量離心管中并測量μL微量移液管。9.將回收的脫鹽低聚體的體積（μl）輸入抗體–寡核苷酸結合計算器。10.輕輕渦旋低聚溶液，使其充分混合。11.重復上述C節所述的濃度測量。12.將計算的ODc/μl低聚原液濃度輸入抗體-寡核苷酸結合計算器。注：過量的不合格寡聚物可無限期儲存在以下-20°C。E、 溶解S-4FB1.以15000 x g的速度短暫離心S-4FB試劑，以確保所有材料在管子的底部。2.向S-4FB中加入40μl無水DMF并渦旋20秒重新懸浮。6737 Mowry Avenue我們一起突破™用戶指南接第2頁。第3頁3.繼續周期性渦旋，直到顆粒全溶解。可能需要上下吸移樣品幾次。4.將全溶解的試劑快速旋轉至試管底部。F、 用S-4FB修飾氨基寡聚體使用A節和B節中輸入的信息寡核苷酸結合計算器將確定體積將無水DMF和S-4FB在無水DMF中加入脫鹽的氨基低聚溶液。這些卷可在C節中找到抗體-寡核苷酸結合計算器。1.向低聚溶液中加入定體積（μl）無水DMF并短暫渦旋混合。2.將溶解在無水DMF中的定體積的S-4FB添加至寡聚物和漩渦混合。不要離心反應混合物加入S-4FB試劑后。3.在室溫下孵育2小時，使S-4FB反應與氨基寡聚物。4.以15000 x g離心管2分鐘，以沉淀任何不溶物反應副產物。在以下G部分中，僅使用澄清上清液（其含有4FB寡聚物）。G、 去除多余的S-4FB1.在4FB寡聚修飾反應結束前5分鐘，通過將每個瓶蓋擰松一半，準備兩個棕色瓶蓋旋轉柱旋轉，擰下每個底部封口，并將每個柱放置在空的2ml收集管。2.使用實驗室標記，在每列的外側放置一條垂直線。確保該線朝外（遠離轉子中心）在該步驟和所有后續步驟中。3.以1500 x g離心柱1分鐘以去除儲存緩沖器重要提示：確保離心機設置為“g"或RCF，而不是RPM在所有離心步驟中。4.從收集管上取下柱（丟棄收集含有過量緩沖液的試管），并將柱放入新的2ml中收集管。5.緩慢小心地用移液管將整個低聚修飾反應移入只有一列的中心。小心不要讓寡聚溶液接觸柱壁；它必須向下通過樹脂本身。6.更換蓋子并松開半圈。保持另一列打開在下一步中，將工作臺頂部（不要將其用作平衡管）。
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