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文化媒體

1.培養(yǎng)基（Neurobasic®/B27®/GutaMAX）有多長(zhǎng)™) 穩(wěn)定的

我們的培養(yǎng)基在4攝氏度的黑暗中保存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。為了防止氧化，介質(zhì)可以等分成更小的體積，并在4攝氏度下儲(chǔ)存。

2.我需要多長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行一次媒體交流？

我們每3到4天更換1/2的培養(yǎng)基，但這在一定程度上取決于細(xì)胞密度。請(qǐng)參閱INVITROGEN（LTI）焦點(diǎn)16:6。如果細(xì)胞密度高于500/mm2，則每2天改變1/2。

3.NbActiv1與NbActiv1有什么區(qū)別™ 和NbActiv4®？

NbActiv4®含有與NbActiv1相同的成分™ 加上固醇、雌激素和肌酸。NbActiv4®主要用作電生理介質(zhì)。

4.在對(duì)海馬培養(yǎng)物進(jìn)行電鍍時(shí)，通常在NbActiv1中添加25μM氨酸鹽™ （Neurobasic®/B27®/谷氨胺最大殘留量™) 或NbActiv4®（Neurobasic®/B27®/GlustaMAX

™/固醇/雌激素/肌酸）培養(yǎng)至第4天。氨酸的用途是什么？

它有助于海馬神經(jīng)元的發(fā)芽和提高生存能力。DIV4之后，應(yīng)使用不含氨酸的培養(yǎng)基進(jìn)行半培養(yǎng)基交換。

5.如果氨酸鹽被排除在外，會(huì)有問(wèn)題嗎？

在DIV4時(shí)，你的生存率會(huì)降低約30%。

6.如果我在NbActiv1中平板細(xì)胞™ 我可以將介質(zhì)更改為NbActiv4®嗎？

是的，在文化中的任何時(shí)候，媒體都可以從NbAcitv1改變™ 至NbActiv4®。然而，事實(shí)并非如此。接種NbActiv4®的細(xì)胞不應(yīng)改為NbActiv1™.

7.我需要什么額外的用品來(lái)維持培養(yǎng)物？

每份訂單包括足夠的培養(yǎng)基，可以開(kāi)始培養(yǎng)并維持4或5天。除此之外，您還需要更多的培養(yǎng)基，我們可以通過(guò)Invitrogen單獨(dú)提供完整的即用配方。您還需要您選擇的鍍膜玻璃或塑料基材，我們建議使用聚-D-賴(lài)氨酸作為基材。除此之外，您還需要解離溶液，我們推薦我們的木瓜蛋白酶和Hibernate®E-Ca以及火拋光移液管。我們將所有這些用品包含在我們的完整培養(yǎng)工具包中。

8.我應(yīng)該在電鍍介質(zhì)中補(bǔ)充抗生素/抗真菌藥物嗎？例如：筆/鏈球菌/真菌唑還是大霉素？

我們通常在沒(méi)有抗菌抗生素和抗真菌藥物的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，并取得了良好的成功。這有三個(gè)優(yōu)點(diǎn)：

首先，當(dāng)出現(xiàn)污染時(shí)，更容易確定污染的來(lái)源。第二，如果你使用抗生素，當(dāng)你感染時(shí)，很難擺脫。第三，抗生素已被證明可以激活神經(jīng)元中的癲癇樣爆發(fā)活動(dòng)。抗生素的使用是一種常見(jiàn)的做法，其類(lèi)型和濃度取決于最終使用者。

Hibernate®媒體

Hibernate®、Neurobasic®和B27®僅用于研究目的，由Invitrogen公司生產(chǎn)。Hibernate®、Neurobasic®和B27®是Invitrogen公司的商標(biāo)。

1.Hibernate®媒體穩(wěn)定多長(zhǎng)時(shí)間？

我們的Hibernate在4攝氏度的黑暗中保存長(zhǎng)達(dá)1年。為了防止氧化，介質(zhì)可以等分成更小的體積，并在4攝氏度下儲(chǔ)存。

2.你總是添加B27®和GlutaMAX嗎™ 到Hibernate®，還是只在Hibernate®中保持細(xì)胞的活力？

幾乎總是這樣。請(qǐng)參閱Brewer和Price（1996）PM:8856709的圖1。在37℃的環(huán)境二氧化碳中，Neurobasic®/B27®/Gutamax中的LD50™ 為24小時(shí)，而在Hibernate®/B27®/GutaMAX®中則超過(guò)3天。

3.我們可以提供定制的Hibernate配方嗎？

是的，我們可以提供Hibernate的自定義配方。

4.Hibernate的其他用途包括：

轉(zhuǎn)基因小鼠基因分型過(guò)程中的腦儲(chǔ)存。

將腦組織運(yùn)送給合作者。

基底

1.我的神經(jīng)元更多地以細(xì)胞簇或團(tuán)塊的形式生長(zhǎng)，而不是孤立的。怎么了？

這意味著細(xì)胞與自身的粘附比與基質(zhì)的粘附更緊密。最有可能的問(wèn)題是基板制備不良。將您的方案與聚-D-賴(lài)氨酸的推薦制備和基質(zhì)涂層進(jìn)行比較。另一種可能性是鍍層密度可能過(guò)高。

2.關(guān)于聚-L-賴(lài)氨酸與聚-D-賴(lài)氨酸，我認(rèn)為使用聚-D-賴(lài)氨酸是因?yàn)槿绻纸鉃橘?lài)氨酸時(shí)，D賴(lài)氨酸就不能被細(xì)胞使用。這是真的嗎？

這就是理論。在一些早期研究中（Brain Res.494:65（1989）），我們發(fā)現(xiàn)差異不大。

3.一些研究人員使用聚乙烯亞胺（PEI）代替聚-D-賴(lài)氨酸（PDL）。一個(gè)比另一個(gè)有優(yōu)勢(shì)嗎？

PEI比PDL便宜。我們?cè)?span>PEI方面沒(méi)有取得太大成功，但Mark Mattson在開(kāi)始在Neurobasic®/10%血清中培養(yǎng)后一直在使用它。報(bào)告顯示，神經(jīng)元存活率或刺突率沒(méi)有顯著差異。

Soussou WV，Yoon GJ，Brinton RD，Berger TW（2007）在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)形態(tài)和電生理學(xué)。IEEE跨生物識(shí)別工程54:1309-1320。下午：17605362

Brewer GJ，Cotman CW（1989）海馬神經(jīng)元在低密度特定培養(yǎng)基中的存活和生長(zhǎng)：三明治培養(yǎng)技術(shù)或低氧的優(yōu)勢(shì)。腦研究494:65-74。下午：2765923。

預(yù)涂PDL培養(yǎng)皿

1.你能推薦任何品牌的預(yù)涂層組織培養(yǎng)瓶或制備用于初級(jí)神經(jīng)元生長(zhǎng)的組織培養(yǎng)瓶的方法嗎？

我們已經(jīng)確定，細(xì)胞培養(yǎng)塑料或玻璃上的聚-D-賴(lài)氨酸涂層在涂層后開(kāi)始失效。涂層玻璃片在14天后失效，涂層塑料在10天后失效。我們懷疑一些預(yù)涂板的工作效果令人滿(mǎn)意，但我們的經(jīng)驗(yàn)是，有幾種預(yù)涂板會(huì)導(dǎo)致初級(jí)神經(jīng)元的粘附性和存活率差。因此，我們建議您涂覆自己的基底，并在一周內(nèi)或上述幾天之后使用。

2.你們銷(xiāo)售預(yù)涂文化用品嗎？

是的，我們銷(xiāo)售PDL涂層燒瓶、井板和卡瓦。我們?cè)谝灰怪g給它們涂上涂層，第二天再發(fā)貨，以便隔夜送達(dá)。我們建議您在一周內(nèi)使用這些產(chǎn)品。

新鮮紙巾

1.你們提供什么年齡的紙巾？

我們的標(biāo)準(zhǔn)組織是胚胎第18天或孕婦（3-4個(gè)月大）的成年組織。所有其他組織年齡均可特殊訂購(gòu)，交貨期為2-3周。

Wolburg H，Neuhaus J，Kniesel U，Krauss B，Schmid EM，Ocalan M，Farrell C，Risau W（1994）血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)。組織培養(yǎng)、第二信使和共培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響。《細(xì)胞科學(xué)雜志》107（第5期）：1347-1357頁(yè)。下午：1692329

Risau W，Engelhardt B，Wekerle H（1990）血腦屏障的免疫功能：

大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白（自身）抗原。細(xì)胞生物學(xué)雜志110:1757-1766。下午：7929640關(guān)于從脊髓中分離運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的更多信息，M.Das、J.W.Rumsey、N.Bhargava、M.Stancescu和J.J.Hickman。一種確定的神經(jīng)肌肉接頭的長(zhǎng)期體外組織工程模型。生物材料31（18）：4880-48882010。下午：20346499

2.你保證每個(gè)小瓶有多少來(lái)自皮層和海馬體的神經(jīng)元？

海馬神經(jīng)元的數(shù)量保證為100萬(wàn)，皮層神經(jīng)元的數(shù)量則保證為200萬(wàn)。其他組織類(lèi)型的數(shù)量不同。

3.有什么保證可以保證動(dòng)物的大腦和脊髓組織是根據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院批準(zhǔn)的方案獲得的？

我們的動(dòng)物方案233-08-013于2020年7月4日獲得南伊利諾伊大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)的批準(zhǔn)。

對(duì)于美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院的撥款，脊椎動(dòng)物部分：

保證編號(hào)為A-3209-01。

F.脊椎動(dòng)物

用于原代培養(yǎng)的海馬、皮層和其他大腦和脊髓神經(jīng)元將從胚胎或出生后早期的大鼠或小鼠的大腦中獲得。使用氟烷麻醉后，將對(duì)大腦進(jìn)行解剖。戊比妥將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉狀態(tài)下被送上斷頭臺(tái)或折斷頸部。這些樂(lè)死方法與美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)樂(lè)死問(wèn)題小組的建議一致。

通過(guò)從動(dòng)物身上分離神經(jīng)元，可以研究比整個(gè)動(dòng)物研究更多的實(shí)驗(yàn)變量，從而減少對(duì)動(dòng)物的需求。大鼠和老鼠的大腦是所有動(dòng)物大腦中研究得好的。

平均住房需求估計(jì)為2天，足以讓嚙齒動(dòng)物從交通創(chuàng)傷中恢復(fù)過(guò)來(lái)。動(dòng)物將由SIUSM實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)中心護(hù)理，該中心經(jīng)AALAC認(rèn)證，有10名工作人員，由Helen Valentine，D.V.M.，MS指導(dǎo)，經(jīng)DACLAM認(rèn)證

使用氟烷麻醉后，將對(duì)大腦進(jìn)行解剖。戊比妥將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉狀態(tài)下被送上斷頭臺(tái)或折斷頸部。這些樂(lè)死方法與美國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)樂(lè)死問(wèn)題小組的建議一致。因此，這些程序?qū)?dòng)物的使用限制在進(jìn)行有科學(xué)價(jià)值的研究時(shí)不可避免的范圍內(nèi)，并將動(dòng)物的不適、痛苦和痛苦降至低。